大家好,小鑫来为大家解答以上的问题。酵母表达质粒构建，质粒构建这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧！

1、1. 通过PCR扩增目的基因片段PCR要设计引物，设计引物时要选择合适的同源序列，根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点，PCR的产物要纯化。

2、2. 酶切 根据引物设计的酶切位点，分别对PCR产物和质粒载体进行酶切，酶切后的产物也要进行回收3. 连接通过连接酶将酶切后的PCR产物和质粒载体进行连接4. 转化将连接产物转化到受体菌中（一般为DH5a），涂板，培养过夜5. 挑取单克隆，并鉴定挑去平板上的单克隆培养，可以通过PCR或者酶切初步鉴定阳性克隆，对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序质粒的构建有很多方法，如果是PCR产物连接到T载体则使用T-A策略，如果是酶切连接刚需要T4连接酶进行连接。

3、你要是有天根全式金载体连接说明书就明白了。

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