核酸杂交法（核酸杂交）

大家好，我是小东，我来为大家解答以上问题。核酸杂交法，核酸杂交很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

1、差别杂交（differential hybridization）又叫差别筛选（differential screening），适用于分离经特殊处理而被诱发表达的mRNA 的cDNA 克隆。 从本质上讲，差别杂交也是属于核酸杂交的范畴。它特别适用于分离在特定组织中表达的基因、在细胞周期特定阶段表达的基因、受生长因子调节的基因、以及在特定发育阶段表达的或是参与发育调节的基因，同时亦可有效地用来分离经特殊处理而被诱发表达的基因。目前，差别杂交筛选法在基因的分离工作中有着相当广泛的用途。 差别杂交的技术基础十分简单，它不需要任何有关的目的基因的核苷酸序 列信息，而重要的是耍拥有两种不同的细胞群体：在一个细胞群体中目的基因正常表达，在另一个细胞群体中目的基因不表达。在这种情况下便可制备到两种不同的 mRNA 提取物。其一是含有一定比例的目的基因mRNA 类型的总mRNA 群体，其二是不含有目的基因mRNA 类型的总mRNA 群体。因此，可以通过这两种总mRNA （或是它们的cDNA 拷贝）为探针的平行杂交，对由表达目的基因的细胞总mRNA 构建的库进行筛选。当使用存在目的基因的mRNA 探针时，所有包含着重组体的菌落都呈阳性反应，在X光底片上呈现黑色斑点，而使用不存在目的基因的mRNA 探针时，除了含有目的基因的菌落外，其余的所有菌落都呈阳性反应，在X光底片上呈现黑色斑点。比较这两种底片并对照原平板，便可以挑选出含目的基因的菌 落，供作进一步研究使用。 差别杂交筛选技术已被成功地用于分析爪蟾和粘菌的发育问题。这两个应用例子表明，处于不同发育状态或阶段的丰度相差5倍的特异的mRNA 种是能够被检测出来的。生长因子调节基因（growth factor-regulated gene）的克隆，是差别杂交成功应用的一个典型例子。我们知道，血清中含有生长因子，因此用血清处理处于静止期的细胞时，便会迅速诱发生长因子调节基因进行表达。所以，分别从静止期细胞培养物和经血清激活3小时的物中提取的poly(A)mRNA 制剂，在mRNA 种类上是有差别的，至少后者比前者多出了一种生长因子调节基因的mRNA 类型。用从激活细胞中分离的poly(A)mRNA 反转录合成的cDNA 与λ噬菌体载体重组，构成cDNA 文库，并同时复制两份硝酸纤维素滤膜。A组滤膜同血清激活细胞制备的cDNA 探针杂交，B组滤膜同静止期细胞制备的cDNA 探针杂交。将所得的放射自显影图片进行仔细的比较，从中鉴定出只同激活细胞探针杂交而不能同静止期细胞探针杂交的噬菌斑位置。这些便有可能是带有受血清诱发表达的生长因子调节基因的DNA 编码序列。

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2、详细资料请参考：on   

3、http://www.bio1000.com/experiment/hesuan/

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