构建质粒载体的基本流程(分子克隆)
大家好,我是小东,我来为大家解答以上问题。构建质粒载体的基本流程,分子克隆很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、载体 所谓载体是指携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。
2、 基因库的建造 特异基因的筛选 核酸序列测定 一、基因克隆的基本方法 一个典型的基因克隆实验,主要有以下操作和结果: (1)包括有目的基因在内的DNA片断插入另一个DNA分子(克隆载体,通常是环状的),形成重组DNA分子。
3、 (2)重组DNA分子通过转化或其他类似的方法被导入受体细胞。
4、大肠杆菌是使用较多的受体细胞。
5、 (3)在受体细胞中,克隆载体指导重组DNA分子复制,产生许多完全相同的拷贝。
6、 (4)当受体细胞分裂时,重组DNA分子的拷贝进入子细胞,克隆载体的复制将在子细胞中继续。
7、 (5)大量分裂的受体细胞形成克隆:一个细胞群体,其中每个细胞都含有许多重组DNA分子的拷贝。
8、 显而易见,基因克隆是一个比较直观而简单的操作程序。
9、它之所以具有非常重要的生物学意义,是因为这一技术可以为我们提供一个纯粹的基因标本。
10、通常,一个基因总是和细胞里其他基因同在。
11、基因克隆技术诞生之前,我们根本无法纯化单个基因,这意味着我们只能对基因群、而不是特定基因的结构与功能进行研究和开发利用。
12、 1、重组DNA分子的构建 构建重组DNA分子是基因克隆实验的第一步,亦即,把环状的载体在指定部位切断,然后把含目的基因的DNA分子插入其中,再将两者连接起来。
13、这一过程需要两种DNA操作酶:限制性内切酶(restriction endonucleases)和连接酶(ligases)。
14、 限制性内切酶能够识别DNA分子上的特定核苷酸序列,并在该处特异性切断DNA分子。
15、例如,PvuI(细菌Proteus vulgaris分离)只识别和切断6核苷酸序列CGATCG;从相同细菌分离的PvuII,却只识别并切断CAGCTG。
16、许多限制性内切酶的识别位点是6个核苷酸,但是,也有识别4个或5个、甚至8个核苷酸顺序的限制性内切酶。
17、此外,有些限制性内切酶的识别顺序可能不是唯一的,例如,HinfI可以识别并切断GAATC、GATTC,GAGTC和GACTC。
18、因此,通常也将HinfI的识别位点记为GANTC,N代表A、T、G和C中的任意一种核苷酸。
19、 经限制性内切酶处理后的DNA分子断端有两种:平端和粘端,它们的性质对基因克隆的实验设计有重要影响。
20、其中,具有不同识别位点的限制性内切酶可以产生相同的粘端。
21、例如,BglII(AGATCT)和BamHI(GGATCC)产生与Sau3A相同的GATC粘端。
22、显然,经上述三种酶处理的DNA分子片断之间均可以在相应的断端形成互补双链。
23、 DNA分子片断通过粘端形成的碱基互补并不能使之相互连接,后一过程需要连接酶的催化作用。
24、所有生物细胞中都产生连接酶,但是,基因克隆中最常用的是T4噬菌体的连接酶。
25、连接酶催化相邻核苷酸之间形成磷酸二酯键。
26、由于平端不能使DNA片断保持相互接近的位置,因而,和粘端相比,连接酶对平端DNA分子之间连接反应的催化效率较差。
27、 2、克隆载体及其主要功能。
本文到此讲解完毕了,希望对大家有帮助。
免责声明:本文由用户上传,与本网站立场无关。财经信息仅供读者参考,并不构成投资建议。投资者据此操作,风险自担。 如有侵权请联系删除!
-
合创汽车试驾预约,快速通道开启豪华体验。即刻预约,享受专属试驾服务,感受智能科技与极致设计的完美融合。...浏览全文>>
-
零跑C16试驾全攻略:零跑C16是一款集智能、空间与性价比于一身的中型SUV。试驾前建议关注其智能座舱系统,支持...浏览全文>>
-
万象汽车试驾,轻松搞定试驾。只需几步,即可预约专属试驾体验。登录官网或APP,选择心仪车型,填写基本信息,...浏览全文>>
-
试驾极氪001前,新手需做好以下准备:首先,提前预约试驾时间,了解车型配置与功能;其次,检查驾驶证、身份证...浏览全文>>
-
职业教育的传承与价值,需在时代发展的逻辑中发展,在技术进步的潮流中进步。二十载的光阴更迭,坚守是优路教...浏览全文>>
-
试驾五菱凯捷可以通过以下几种常见途径进行:1 到店预约试驾 消费者可以前往当地的五菱4S店或授权经销商,...浏览全文>>
-
大力牛魔王试驾全攻略试驾一款新车,尤其是像“大力牛魔王”这样充满科技感的电动车型,需要提前做好充分准备...浏览全文>>
-
想要快速锁定北汽雷驰的试驾名额,您可以采取以下步骤:首先,提前了解北汽雷驰的试驾活动安排。通常品牌会在...浏览全文>>
-
试驾零跑汽车零跑C01,感受其带来的豪华驾乘与卓越性能。这款车型以科技感和舒适性为核心卖点,为用户带来全新...浏览全文>>
-
试驾小鹏P7+是一次令人愉悦的体验,从踏入4S店的那一刻起,就感受到无微不至的服务。工作人员热情迎接,并详细...浏览全文>>
- 合创汽车试驾预约,快速通道开启豪华体验
- 北汽雷驰试驾预约如何快速锁定试驾名额?
- 坦克试驾,开启完美驾驭之旅
- 零跑汽车试驾,如何在4S店快速预约?
- 昌河北斗星X5试驾,简单几步,开启完美试驾之旅
- 大众预约试驾如何快速锁定试驾名额?
- 试驾奔驰迈巴赫S级预约流程
- 极氪007试驾预约预约流程
- 试驾极氪009怎么预约
- 试驾深蓝S05的流程是什么
- 极狐 阿尔法S(ARCFOX αS)试驾,从咨询到试驾的完整体验
- 奔驰预约试驾,轻松几步,畅享豪华驾乘
- 奇瑞新能源试驾,体验极致驾驶乐趣
- 试驾本田雅阁,轻松搞定试驾流程
- Polestar极星试驾,从咨询到试驾的完整体验
- 北汽雷驰预约试驾需要哪些条件
- 捷途旅行者预约试驾,开启完美驾驭之旅
- 荣威预约试驾全攻略
- 山西二本综合院校排名及分数线一览表
- 300分能上的公办专科大学排名一览表