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引物二聚体太亮怎么办(引物二聚体)

导读 大家好,小金来为大家解答以上的问题。引物二聚体太亮怎么办,引物二聚体这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!1、一 引物设计和样品

大家好,小金来为大家解答以上的问题。引物二聚体太亮怎么办,引物二聚体这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!

1、一.引物设计和样品使用均是一样的情况,就是反应条件的问题二.反应条件就看你的实验操作和所使用的仪器,操作都一样的话,仪器设定上出问题的可能性会大一些,其中退货温度是比较关键的三.人品问题也会导致这样的情况四.一般减少引物二聚体的方法:1.从引物自身着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法;2.可能模板有问题;3.模板浓度过小,适当加大模板量;4.Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高,可降低它们的浓度;5.取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的;6.所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO,可以增强特异性;7.PCR反应体系的配制在冰上进行,最后加TAq酶,PCR结束后,产物勿放置在室温下过长时间,有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体;8.增加循环数;9.降低退火温度后有条带,则应逐渐提高温度,若提高温度的同时产物量减少,则考虑增加镁离子浓度(根据扩增片断长度而定,片段长则相应镁离子浓度应该高一些);10.若降低退火温度,发现还是只有引物二聚体,而且镁离子的浓度在20-25mmol/l没有区别,则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀,导致吸取的试剂浓度不对;11.以上次的PCR产物作模板二次PCR,可以提高引物与模板的特异性,减少引物二聚体,如果两次时间间隔短的话,可以把原产物稀释100-1000倍,如果间隔较长可以稀释50-100倍。

2、别的组的同学用的引物跟你的引物是一样的吗?如果一样的话,那就要考虑您的模板质量的问题了。

3、如果扩增不成功,电泳图的底部都会有引物的条带。

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