pulldownmachine(pulldown)
大家好,小金来为大家解答以上的问题。pulldownmachine,pulldown这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、pull-down 和co-IP的区别如下:区别一:Co-IP作用:Co-IP,证明两个蛋白在胞内有相互作用,但是这个作用可以是直接相互作用,也可以是形成复合物后的间接相互作用。
2、区别二:pull-down作用:pull-down,胞外纯化蛋白后证明两个蛋白之间有相互作用,这个相互作用必然是直接相互作用。
3、区别三:Co-IP,in vivo作用:Co-IP,in vivo,可以证明两个蛋白在体内至少会形成复合物,但不能确定是否是直接相互作用的,这就必须借助于pull-down了,两者缺一不可。
4、区别四:Co-IP与Pull-down的结合:pull-down一般只用一个带GSTtag的重组蛋白,与目的蛋白进行孵育,最后用结合GST的Beads拉下相互作用复合物。
5、co-IP一般是用某一蛋白的抗体,在细胞裂解液中与相应的蛋白结果,用Protein A/G将抗原抗体复合物拉下,最后在拉下的复合物中检测目的蛋白的实验。
6、扩展资料:Co-IP与GSTPull-down,本质上都是亲和层析。
7、假设要研究M蛋白能否与N蛋白互作。
8、Co-IP技术的原理是,用一个小磁珠,上面偶联着A/G蛋白,该蛋白可以与抗体的恒定区结合。
9、在Co-IP的结果图中,我们经常可以看到IP:M这样的字样。
10、IP:M代表着,体系中加入了M蛋白的抗体。
11、则一个拉一个,小磁珠上会结合有A/G蛋白-M蛋白的抗体-M蛋白。
12、若M蛋白与N蛋白有互作,则N蛋白也会在小磁珠上,最终被检测到。
13、而如果M蛋白与N蛋白没有互作,则N蛋白不会出现于小磁珠,最终无法检测到N蛋白。
14、而对于GST Pull-down,假设要研究M蛋白能否与N蛋白互作,该方法需先将M蛋白与谷胱甘肽巯基转移酶GST构建成融合蛋白,之后在谷胱甘肽亲和层析柱中上样,令M蛋白结合于层析柱。
15、再将N蛋白过柱子,若层析柱最终结合有N蛋白,则代表M蛋白与N蛋白可互作。
16、Co-IP,证明两个蛋白在胞内有相互作用,但是这个作用可以是直接相互作用,也可以是形成复合物后的间接相互作用。
17、pull-down,胞外纯化蛋白后证明两个蛋白之间有相互作用,这个相互作用必然是直接相互作用。
18、Co-IP,in vivo,可以证明两个蛋白在体内至少会形成复合物,但不能确定是否是直接相互作用的,这就必须借助于pull-down了,两者缺一不可。
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